DNA Methylation Kit
DNA甲基化试剂盒
¥898.00
CW2140M
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本试剂盒基本原理为DNA经亚硫酸氢盐处理后，可使未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变。
本试剂盒采用碱变性的处理方法，能够在温和条件下使DNA双链变性，保证DNA完整性的同时提高转化效率，转化效率可达到99.5%以上。同时通过转化产物与吸附柱结合，从亚硫酸氢盐修饰后的溶液中回收纯化DNA，回收的DNA纯度高，完整性好，可直接用于测序、甲基化PCR检测、芯片分析等下游实验。
▪ 高转化效率：未甲基化的胞嘧啶转化效率大于99.5%
▪ 高核酸完整性：对核酸的损伤小，有利于下游检测
▪ 高回收率：回收率大于80%
▪ 高样本兼容性：可兼容投入量范围为100pg-2μg的DNA、cfDNA
| 保存条件 | 运输条件 |
|---|---|
| 吸附柱DF 2-8℃保存，其余组分室温（15-30℃）保存 | 常温 |
水、TE 或改良的 TE 缓冲液可用于溶解 DNA，并且不会干扰转化过程。
甲基化转化过程中，转化时间过久会引起甲基化的C部分变成U，导致假阴性，请严格按照操作说明书进行操作。
对基因组DNA进行亚硫酸氢盐处理后，因为非甲基化的胞嘧啶残基转化为尿嘧啶，所以原始碱基配对不再存在，回收的DNA通常富含A、U和T，并且在室温下为单链，具有有限的非特异性碱基配对。260 nm处的吸收系数与RNA的吸收系数相似。当纯化后的基因组DNA OD260为1时，相当于约40 μg/mL的核酸浓度。
基于处理后核酸状态的特殊性，其OD230会出现异常现象，可能导致OD260/OD230比值不稳定，实验表明这种情况不影响后续的PCR反应。OD260/OD280比值应为1.7-1.9。如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
通常，亚硫酸氢盐转化的DNA需要35至40个循环才能成功进行PCR扩增，最佳扩增子大小应在150-300 b p之间，但是通过优化PCR条件可以生成更大的扩增子（高达1 kb），55-60℃之间的退火温度通常效果良好。由于大多数非甲基化胞嘧啶残基会转化为尿嘧啶，因此亚硫酸氢盐处理的DNA通常富含 AT，也正因为这样，非特异性 PCR 扩增也会相对常见，强烈建议使用“热启动”聚合酶进行亚硫酸氢盐处理后DNA 的PCR扩增。
注：康为世纪CW3332：FastStar Probe Kit (for bisDNA) 主要应用于以亚硫酸氢盐处理的DNA为模板的探针法荧光定量PCR。其中的SuperFastStar DNA Polymerase是一种经双单克隆抗体修饰的、全新高效热启动酶。
（1）对转化产物的定量方式选择错误：转化产物以单链形式存在，应使用ssDNA定量方式。
（2）Input DNA有杂质：确保DNA的A260/A280比值在1.8 - 2.0之间；
（3）漂洗缓冲液乙醇含量不足：请加入试剂瓶标签上指定体积的无水乙醇，勿长时间开盖放置；
（4）缓冲液DB中有机溶剂含量不足：请勿长时间开盖放置；
（1）转化液失效：转化液对光敏感，应避光保存，避免暴露在光线下；
（2）反应温度或时间设置错误：请按照说明书正确设置反应温度与时间；
（3）Input DNA样本GC投入量过高：应根据样本特殊性适当减少投入量。
亚硫酸氢盐修饰后的DNA建议立即检测，否则请于-20℃以下保存，保存时间不超过1个月，长期保存需置于-70℃或以下，并应避免反复冻融。
