
Magbead Plant DNA Kit
磁珠法植物DNA提取试剂盒
¥598.00
CW2528S
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支持。CW2528S适配 CWE2100 和 CWE960 全自动核酸提取仪。
严禁冷冻或高速离心,否则可能导致磁珠不可逆损坏。使用前需充分混匀,避免沉淀。
在 Buffer PLS 中加入 β-巯基乙醇,使其终浓度为 5%,可有效改善提取效果。
洗脱后可能有少量磁珠残留,不影响PCR、测序等下游应用,但可能影响吸光度读数。
若下游实验对pH值或EDTA敏感,可采用灭菌水作为洗脱液。使用前需调节水的pH值至7.0-8.5(可用NaOH调节),pH值低于7.0会显著降低洗脱效率。如需长期保存洗脱产物,推荐使用Buffer TB洗脱,并于-20℃保存。
DNA产量低通常由以下原因导致,请根据实际情况优化操作:
1) 试剂保存或使用不当。 Buffer GW1使用前应按试剂瓶标签向其中加入指定用量的无水乙醇。同时,请确保所有缓冲液均密封保存,防止蒸发导致浓度改变。Magbeads PN磁珠在使用前务必充分涡旋或颠倒混匀,使其充分重悬。
2) 样本处理或本身存在问题。 样本裂解不完全是产量低的一个主要原因。请确保植物组织已通过液氮研磨或组织破碎仪充分破碎为细粉。对于多糖多酚含量高的植物,请在Buffer PLS中加入β-巯基乙醇至终浓度5%以改善裂解效果。同时,样本的质量和储存条件也极大影响结果,应使用新鲜或妥善保存的样本,反复冻融会严重降解DNA。请确认您的样本起始量在推荐范围内。
3) 关键操作步骤执行存在偏差。
o 结合步骤: 加入Buffer ZB和磁珠后,应充分颠倒混匀30秒,并室温静置5分钟,其间颠倒混匀数次,确保DNA与磁珠充分结合。
o 洗涤步骤: 在漂洗阶段,要小心操作避免吸弃上清时意外吸走磁珠。
o 干燥步骤: 乙醇洗涤后,磁珠应室温干燥5-10分钟,直至无乙醇气味,但应避免过度干燥,否则会导致DNA洗脱效率下降。
o 洗脱步骤: 使用100 μL Buffer TB,并在65℃下震荡孵育10分钟,以确保DNA充分洗脱。
DNA在下游应用中表现不佳通常由以下原因导致:
1) 洗脱液中DNA含量极低。解决办法:请参考前文A6部分的解决方案。
2) 洗脱液中存在磁珠残留。解决办法:微量磁珠残留通常不影响实验结果。如需进一步去除,可将含有洗脱液的离心管置于磁力架上吸附后,小心转移上清至新管。
3) 存在盐离子残留。解决办法:严格按说明书操作顺序加入Buffer GW1和75%无水乙醇。
4) DNA用量过多影响下游实验。解决办法:过量DNA可能抑制酶反应,建议使用分光光度计在260 nm处测定DNA浓度,精确控制使用量
1. A260/A280比值低(<1.7)。原因:蛋白或乙醇残留导致污染。解决方法:
1) 确保裂解充分:确保植物组织已通过液氮研磨或组织破碎仪充分破碎为细粉。
2) 去除乙醇残留:漂洗步骤完成后将离心管固定于磁力架上室温静置5-10分钟使乙醇充分挥发。
2. A260/A280比值高(>2.0)。原因:核酸降解。
解决方法:
1) 避免降解:使用新鲜样本,避免样本反复冻融。
2) 优化洗脱:若采用灭菌水作为洗脱液。使用前需调节水的pH值至7.0-8.5(可用NaOH调节)。
可使用以下配套产品:
1) CW3048:CWSeq Universal DirectFast DNA Library Prep Kit
2) CW3047:CWSeq Super HiFi Amplification Mix for NGS
3) CW3360:SuperStar Universal SYBR Master Mix-SYBR