
核酸提取或纯化试剂
¥1098.00
CWY118S
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保存条件 | 运输条件 |
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DNA酶和10×DNA酶反应液-20℃,吸附柱2-8℃,其余组分0-35℃ | 吸附柱、DNA酶和10×DNA酶反应液冰袋运输,其余组分常温 |

CWY118S适用于从福尔马林固定或石蜡包埋(FFPE)组织样本中提取核酸。
向每支25 mg蛋白酶K粉末中加入1.25 mL蛋白酶K保存液,轻柔混匀溶解,终浓度为20 mg/mL。分装后于-20℃保存,避免反复冻融。
脱蜡剂在低于18℃时会凝固,属正常现象。使用前可在56℃水浴中加热融化,不影响使用效果。
若裂解缓冲液1、裂解缓冲液2和脱蜡剂有结晶或者沉淀,请将其于56℃水浴重新溶解。
吸附柱堵塞通常因样本量过多导致。建议减少起始组织切片数量至1-2片,并确保裂解充分。
裂解离心后,上清液用于RNA提取,沉淀用于DNA提取。转移上清时切勿吸到沉淀。
1. 使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。
2. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。
3. 配制溶液应使用无RNase的水。
4. 操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。
1) 样本量过多或过少:切片数量或组织量超出推荐范围(建议1–5片,约1×1 cm²)可能导致裂解不彻底或吸附柱堵塞。建议减少起始样本量至1–2片,确保充分裂解和顺利过柱。
2) 脱蜡不彻底:脱蜡步骤若未彻底去除石蜡,会影响后续裂解和核酸释放。需确保脱蜡后彻底吸弃上清,避免残留脱蜡液。可用小体积枪头小心吸除残留液体。
3) 蛋白酶K活性不足:蛋白酶K若反复冻融或保存不当,活性下降会影响裂解效率。应置于-20℃保存,避免多次冻融。
4) 乙醇残留:漂洗后若乙醇未彻底挥发,会抑制后续酶反应并影响洗脱效率。建议延长离心晾干时间(室温5分钟),确保吸附柱完全干燥。
5) 洗脱条件不当:洗脱液pH值或体积不合适会影响回收率。若用水洗脱,需确保pH在7.0–8.5之间;建议使用洗脱缓冲液,适当延长室温静置时间(5分钟),或进行二次洗脱以提高产量。
6) 样本保存或处理问题:若样本长期暴露于空气中或固定不当,可能导致核酸降解。建议使用新鲜样本,避免表面氧化层,弃用接触空气的2–3片切片。
若RNA产物中存在DNA污染,可使用试剂盒内附的DNA酶进行处理。在RNA提取过程中,当样本裂解液结合至吸附柱RS并初步离心后,请按以下步骤操作:
1) 向吸附柱中加入350 μL漂洗缓冲液3,12,000 rpm离心1分钟,弃废液;
2) 配制DNase I混合液:52 μL灭菌水加入8 μL 10×DNA酶反应液和20 μL DNA酶(1 U/μL),混匀后全部加入吸附柱中;
3) 20–30℃孵育15分钟;
4) 再加入350 μL漂洗缓冲液3,12,000 rpm离心1分钟,弃废液,后续按说明书继续操作即可。
若DNA提取产物中存在RNA污染,可通过以下步骤处理:
在DNA提取过程中加入RNA酶A消化步骤。具体而言,在样本裂解后、加入裂解缓冲液2前,将样品温度降至室温,加入2μL浓度为100mg/mL的RNA酶A溶液,震荡混匀后室温放置2分钟,即可有效去除RNA污染。