甲基化检测样本前处理试剂盒
¥698.00
CWY122M
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DNA经亚硫酸氢盐处理后，可使未甲基化的胞嘧啶转变为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，进而实现甲基化碱基的识别。本试剂盒将DNA变性和亚硫酸氢盐转化过程整合为一步，极大缩短了转化时间而不影响转化效率，转化效率可达到99.5%以上。
本试剂盒通过结合纯化柱，从亚硫酸氢盐修饰的溶液中回收DNA，回收的DNA纯度高，完整性好，可直接用于测序、甲基化PCR等下游实验。
▪ 转化速度快：转化反应仅需70 min。
▪ 转化回收效率高：未甲基化的胞嘧啶转化效率≥ 99.5%，回收率＞80%。
▪ 投入量范围广：支持100 pg~2 μg范围DNA投入量。
▪ 样本兼容范围广：支持粪便、血液、组织、体液等提取纯化后的DNA、cfDNA为起始样本。
1. 转化效率高
【实验1】以293细胞gDNA掺入1% Unmethylated Lambda DNA为模板，投入量分别为2 ng、10 ng、100 ng和500 ng，分别使用康为世纪CWY122以及行业标杆A公司的试剂盒进行亚硫酸氢盐处理及纯化，得到的核酸利用λ DNA甲基化特异性引物进行扩增，扩增产物依次进行AGE鉴定、胶回收、NGS建库及分析。
图1：甲基化转化试剂盒的转化效率对比结果
实验结果表明：康为世纪的甲基化检测样本前处理试剂盒胞嘧啶转化为尿嘧啶的效率在99.5%以上。
2. 回收率高
【实验2】以人甲基化DNA标准品为模板，分别使用康为世纪CWY122和行业标杆A公司的试剂盒进行亚硫酸氢盐处理及纯化，得到的核酸使用Nanodrop定量分析。
图2：甲基化转化试剂盒的回收率对比结果
实验结果表明：康为世纪的甲基化检测样本前处理试剂盒的回收率总体在80%以上，明显优于A公司。同时回收率会因样本类型、样本DNA片段大小、样本投入量以及样本质量而有所差异。
| 保存条件 | 运输条件 |
|---|---|
| 吸附柱DF 2-8℃保存，其余组分15-30℃保存 | 吸附柱冰袋运输，其余组分室温运输 |
水、TE 或改良的 TE 缓冲液可用于溶解 DNA，并且不会干扰转化过程。
甲基化转化过程中，转化时间过久会引起甲基化的C部分变成U，导致假阴性，请严格按照操作说明书进行操作。
对基因组DNA进行亚硫酸氢盐处理后，因为非甲基化的胞嘧啶残基转化为尿嘧啶，所以原始碱基配对不再存在，回收的DNA通常富含A、U和T，并且在室温下为单链，具有有限的非特异性碱基配对。260 nm处的吸收系数与RNA的吸收系数相似。当纯化后的基因组DNA OD260为1时，相当于约40 μg/mL的核酸浓度。
基于处理后核酸状态的特殊性，其OD230会出现异常现象，可能导致OD260/OD230比值不稳定，实验表明这种情况不影响后续的PCR反应。OD260/OD280比值应为1.7-1.9。如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。
（1）对转化产物的定量方式选择错误：转化产物以单链形式存在，应使用ssDNA定量方式。
（2）Input DNA有杂质：确保DNA的A260/A280比值在1.8 - 2.0之间；
（3）漂洗缓冲液乙醇含量不足：请加入试剂瓶标签上指定体积的无水乙醇，勿长时间开盖放置；
（4）缓冲液DB中有机溶剂含量不足：请勿长时间开盖放置；
（1）转化液失效：转化液对光敏感，应避光保存，避免暴露在光线下；
（2）反应温度或时间设置错误：请按照说明书正确设置反应温度与时间；
（3）Input DNA样本GC投入量过高：应根据样本特殊性适当减少投入量。
亚硫酸氢盐修饰后的DNA建议立即检测，否则请于-20℃以下保存，保存时间不超过1个月，长期保存需置于-70℃或以下，并应避免反复冻融。
使用磁珠BQ前，一定要混匀，磁珠BQ沉降速度较快，多个样本的加入磁珠的时候中间一定要经过几次摇匀，推荐先加缓冲液CL及转化后产物，最后再加磁珠BQ，以免磁珠沉降。
正常现象，不影响试剂效果。
