Mouse Tail Genomic DNA Kit

鼠尾基因组DNA提取试剂盒

¥368.00

CW2094S

50 preps

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  • FAQs
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的小鼠或大鼠鼠尾中提取高纯度的总DNA。该试剂盒提供的方法简单易行,纯化过程无需苯酚或氯仿抽提,可获得最大为50 kb的DNA片段,同时对100 bp的片段也能有效回收。本试剂盒采用独特的裂解液,有效裂解鼠尾样本,优化的缓冲体系使裂解鼠尾后产生的DNA高效结合到硅基质吸附柱上,而其他污染物可流过膜;PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除,最后使用低盐缓冲液或水洗脱,即可得到高纯度的DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
保存条件 运输条件
RT(15-30℃) 常温
Q1:样品应如何保存?
A1:

样品应避免反复冻融,否则会导致DNA片段较小且提取量下降。

Q2: Buffer GL 出现结晶或沉淀怎么办?
A2:

将其置于56℃水浴中加热直至结晶或沉淀完全溶解。

Q3:吸附柱发生堵塞可能是什么原因?如何解决?
A3:

1) 组织量过多。解决:确保组织的起始量不要超出推荐范围(0.4-0.6 cm)。

2) 消化不完全。解决:延长56℃消化时间直至溶液完全澄清,必要时补加20 μL Proteinase K。

3) 省略离心步骤(未去不溶物)、一次性上样量过大或离心力不足。解决:分次上样;确保离心机转速达12,000 rpm;彻底弃除步骤4中的沉淀。

Q4:能否用水洗脱DNA?
A4:

若下游实验对pH值或EDTA敏感,可采用灭菌水作为洗脱液。使用前需调节水的pH值至7.0-8.5(可用NaOH调节),pH值低于7.0会显著降低洗脱效率。如需长期保存洗脱产物,推荐使用洗脱缓冲液,并于-20℃保存。

Q5:加入Buffer GL和无水乙醇后出现白色沉淀是否正常?
A5:

是正常现象,不会影响后续实验。

Q6:是否可以将Proteinase K和裂Buffer GTT预混?
A6:

不可以。

Q7:使用CW2094S提取的DNA出现RNA污染该如何解决?
A7:

如需去除RNA,可在56℃消化完成后加入4 μL 100 mg/mL RNase A溶液(货号:CW0601S),震荡混匀,室温放置5-10分钟。

Q8:DNA产量低的解决办法?
A8:

1) 应尽可能选择新鲜的样本;

2) 样本起始投入量不要超过所用方法的起始量标准;

3) 样品保存时要尽可能的避免反复冻融;

4) 样本应进行充分裂解:样本应充分研磨;延长56℃消化时间;必要时可额外添加20 μL Proteinase K;

5) Buffer GW1和Buffer GW2中无水乙醇添加量不准确或漏加,应按照试剂瓶标签正确添加无水乙醇;

6) 洗脱不充分: DNA 产物洗脱的时候,预热洗脱液并滴加在膜中央位置,尽可能的覆盖整个吸附膜,增加洗脱体积或者二次洗脱也可增加产量。

Q9:提取的 DNA 纯度低的原因及该解决办法?
A9:

1. A260/A280比值低(<1.7)。原因:蛋白或乙醇残留导致污染。解决方法:

1) 确保裂解充分:使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀,如有结晶或者沉淀,请将其置于56℃水浴重新溶解。 

2) 去除乙醇残留:吸附柱空离2分钟后将吸附柱开盖置于室温数分钟,以彻底晾干。

2. A260/A280比值高(>2.0)。原因:RNA残留或核酸降解。

解决方法:

1) 可在消化完成后加入4 μL RNase A(100 mg/mL)溶液,震荡混匀,室温放置5-10分钟。RNase A本试剂盒并未提供,如需要可单独向本公司订购,货号:CW0601S。

2) 避免降解:使用新鲜样本,避免样本反复冻融。

3) 优化洗脱:若采用灭菌水作为洗脱液。使用前需调节水的pH值至7.0-8.5(可用NaOH调节)。

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