1) 样本量过多或过少：切片数量或组织量超出推荐范围（建议1–5片，约1×1 cm²）可能导致裂解不彻底或吸附柱堵塞。建议减少起始样本量至1–2片，确保充分裂解和顺利过柱。

2) 脱蜡不彻底：脱蜡步骤若未彻底去除石蜡，会影响后续裂解和核酸释放。需确保脱蜡后彻底吸弃上清，避免残留脱蜡液。可用小体积枪头小心吸除残留液体。

3) 蛋白酶K活性不足：蛋白酶K若反复冻融或保存不当，活性下降会影响裂解效率。应置于-20℃保存，避免多次冻融。

4) 乙醇残留：漂洗后若乙醇未彻底挥发，会抑制后续酶反应并影响洗脱效率。建议延长离心晾干时间（室温5分钟），确保吸附柱完全干燥。

5) 洗脱条件不当：洗脱液pH值或体积不合适会影响回收率。若用水洗脱，需确保pH在7.0–8.5之间；建议使用洗脱缓冲液，适当延长室温静置时间（5分钟），或进行二次洗脱以提高产量。

6) 样本保存或处理问题：若样本长期暴露于空气中或固定不当，可能导致核酸降解。建议使用新鲜样本，避免表面氧化层，弃用接触空气的2–3片切片。