调整转膜参数：

1.对大分子量蛋白，可适当提高电压/电流或延长转印时间；

2. 优化转膜缓冲液：SDS通过增强蛋白质的负电性和流动性促进其从凝胶中洗脱，但同时会竞争性抑制蛋白质与膜的结合（该效应在硝酸纤维素膜上比PVDF膜更显著）。针对难转移的大分子量蛋白质（>100 kDa）大分子量蛋白易滞留凝胶中，可在转膜缓冲液中添加0.01-0.02% SDS促进洗脱。建议转膜前将凝胶置于含0.02-0.04% SDS的无甲醇缓冲液中预平衡10分钟，再使用含10%甲醇+0.01% SDS的缓冲液转印。

3. 调整甲醇浓度：甲醇可增强蛋白与膜结合，但会收缩凝胶孔径、降低转印效率，尤其影响大分子蛋白；建议将甲醇浓度控制在10%-20%，并使用高质量的分析级甲醇避免杂质干扰。

选择合适膜材：PVDF膜对蛋白结合能力优于NC膜，尤其适用于大分子量或低丰度蛋白；若使用NC膜，可尝试添加SDS改善转印效果。