1. 样品降解或核酸含量低：样品反复冻融或保存不当易导致核酸降解。应使用新鲜样品或正确保存的样品，实验前注意评估样品状态。

2. 样品裂解不充分：组织或细胞未彻底匀浆会导致核酸释放不全。加入 Buffer RL 后须充分吹打或研磨，确保样本充分裂解。

3. 未加β-巯基乙醇：Buffer RL 中漏加β-巯基乙醇会严重影响裂解效率。Buffer RL使用前必须按每1 mL Buffer RL 加10 μL的比例添加β-巯基乙醇并混匀。

4. 样本量过多：样本量超过试剂盒允许范围易导致提取效率下降。应严格遵守说明书样本量要求（如组织≤30 mg，细胞≤10⁷）。

5. 培养液有残留：残留培养液会稀释裂解液并引入杂质。加 Buffer RL 前须彻底清除培养液。

6. 乙醇未彻底晾干：吸附柱中残留乙醇会抑制核酸洗脱。漂洗完成后应室温开盖放置数分钟以彻底晾干吸附柱中残留的乙醇。

7. 漂洗缓冲液未加污水乙醇。 Buffer RW2/GW1/GW2未加无水乙醇漂洗时会洗脱膜上核酸，造成严重损失。 使用前务必按试剂瓶标签加入指定量的无水乙醇，混匀后使用。

8. 洗脱方法不正确：洗脱液量不足、未滴加在膜中央或静置时间不够会导致洗脱不全。RNA 洗脱液应≥30 μL，DNA 应≥100 μL，滴加于膜中心，静置至少2分钟（RNA）或5分钟（DNA）再离心。可回收首次洗脱液重新过柱以提高得率。