Ultrapure RNA Kit(DNase I)

超纯RNA提取试剂盒(DNase I)

¥758.00

CW0597S

50 preps

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本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒,本制品可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。首先裂解液充分裂解并匀质化样本,在特有的高盐状态下,RNA特异性地与硅基质膜结合,在极大程度减少了蛋白污染的同时有效去除了有机溶剂的污染,得到的RNA纯度更好,质量更高。本产品可从各种细胞或组织中快速提取总RNA,每次可处理30-50 mg组织或5×106细胞,可同时处理多个不同样品。如果是对微量DNA非常敏感的RNA实验,残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除,提取后的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
保存条件 运输条件
DNase I & 10×Reaction Buffer -20℃,TRIzon PaI ™&TRIzon Reagent 2-8℃ in the dark,others RT(15-30℃) 常温
Q1:TRIzon Reagent出现沉淀怎么办?
A1:

TRIzon Reagent中出现沉淀,可将其置于56℃水浴中加热几分钟,沉淀即可溶解,不影响使用

Q2:离心后溶液不分层,或分层不明显的原因及解决办法?
A2:

离心后溶液不分层,主要可能由以下原因导致:

1. 混合不充分:加入TRIzon PalTM后,需剧烈振荡至少15秒,以确保充分混合,此为分相的关键前提。

2. TRIzon PalTM比例错误:请务必确认TRIzon PalTM添加量准确无误。标准比例为每使用1 mL TRIzon试剂需加入0.2 mL TRIzon PalTM

3. 样品过载或过于粘稠:当处理蛋白、多糖或脂肪含量高的特殊样本时,裂解液会异常粘稠,阻碍分相。可在加入TRIzon PalTM前,先将匀浆液于 4℃、12,000 rpm 离心10分钟,弃除沉淀,取上清进行后续操作。

若已发生不分层情况,可尝试以下补救措施:

1. 再次混合与离心:在确认TRIzon PalTM已按比例添加的前提下,将反应液再次剧烈振荡,并于 4℃、12,000 rpm 条件下重新离心。

2. 追加TRIzon PalTM:若高度怀疑TRIzon PalTM添加量不足,可谨慎地补加少量TRIzon PalTM,随后充分振荡并离心。

Q3:为什么我的RNA产量很低?
A3:

 可能的原因包括:

1. 样品降解:提取的样品应避免反复冻融。

2. 样本量过大:样品体积不应超过TRIzon体积的10% 。

3. 裂解不充分:加入TRIzon后需反复吹打使样本充分裂解 。

4. 洗脱体积过小:RNase-Free Wate体积不应小于30 μL,体积过小影响回收率

5. Buffer RW2未按试剂瓶标签加入相应体积的无水乙醇:Buffer RW2第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。

Q4:如何预防RNase污染:
A4:

1. 使用无RNase的塑料制品和枪头,避免交叉污染。

2. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟,用水彻底冲洗后高压灭菌。

3. 配制溶液应使用无RNase的水。

4. 操作人员戴一次性口罩和手套,实验过程中要勤换手套。

Q5:如何避免提取的RNA中有DNA污染?
A5:

1. 建议减少样本起始投入量。

2. 对于复杂样本如肌肉、脂肪组织等,可在匀浆后先进行离心(4℃, 12,000 rpm, 10分钟)以除去不溶物质,包括高分子量DNA。

3. 吸取水相时需小心,可适当保留,切勿吸到中间层和下层,避免基因组污染。

4. 加入TRIzon PalTM后,需在4℃下离心。

Q6:A260/A280比值偏低怎么办?
A6:

A260/A280比值低可能的原因及解决方案如下:

1. 水相吸取时被酚或蛋白污染。解决方案:吸取水相时需小心,可适当保留,切勿吸到中间层和下层,避免基因组污染。

2. 样品裂解或匀浆不充分。解决方案:可以适当增加TRIzom Reagent或者降低组织投入量进行提取。

Q7:DNase I工作液如何配制?
A7:

52 μLRNase-Free Water,向其中加入8 μL 10×Reaction Buffer20 μL DNase I1 U/μL),混匀, 配制成终体积为80 μL的反应液。

Q8:试剂盒中的TRIzon Reagent和TRIzon Pal™是否可以单独购买?
A8:

可以。TRIzon ReagentTRIzon Pal™的货号分别为CW0580SCW3166M

Q9:CW0597S RNA洗脱体积最少投入量?
A9:

说明书建议洗脱体积为30-50 μL,若样本RNA含量低,可适当降低洗脱体积但不少于30 μL

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