TRIzon Pal™ 是一种可替代有毒氯仿的相分离试剂。它与TRIzon Reagent配合使用，能有效分离样品裂解液中的RNA（水相）、DNA（中间相）和蛋白质（有机相），从而高效去除蛋白质等杂质，最大限度地保证RNA的完整性和纯度。

RNA沉淀难以溶解，可通过以下方法解决或避免：

1. 避免沉淀过度干燥：乙醇洗涤后，室温晾干 2-3分钟即可。过度干燥会严重影响RNA的复溶性。

2. 确保彻底去除有机溶剂：RNA沉淀中若残留异丙醇，会极大阻碍其溶解。务必严格按照说明书要求，使用 75%乙醇（必须用无RNase的水配制） 充分洗涤沉淀。

3. 分次溶解：先加入少量无RNase水（如30 μL）充分溶解沉淀，随后根据所需浓度再补充水量。

A3：离心后溶液不分层，主要可能由以下原因导致：

1. 混合不充分：加入TRIzon Pal™后，需剧烈振荡至少15秒，以确保充分混合，此为分相的关键前提。

2. TRIzon Pal™比例错误：请务必确认TRIzon Pal™添加量准确无误。标准比例为每使用1 mL TRIzon试剂需加入0.2 mL TRIzon Pal™。

3. 样品过载或过于粘稠：当处理蛋白、多糖或脂肪含量高的特殊样本时，裂解液会异常粘稠，阻碍分相。可在加入氯仿前，先将匀浆液于 4℃、12,000 rpm 离心10分钟，弃除沉淀，取上清进行后续操作。

若已发生不分层情况，可尝试以下补救措施：

1. 再次混合与离心：在确认TRIzon Pal™已按比例添加的前提下，将反应液再次剧烈振荡，并于 4℃、12,000 rpm 条件下重新离心。

2. 追加氯仿：若高度怀疑TRIzon Pal™添加量不足，可谨慎地补加少量TRIzon Pal™，随后充分振荡并离心。

可能的原因包括：

1. 样品降解：提取的样品应避免反复冻融。

2. 样本量过大：样品体积不应超过TRIzon体积的10% 。

3. 裂解不充分：加入TRIzon后需反复吹打使样本充分裂解 。

4. 细胞培养液未去除干净：收集细胞时务必仔细吸除所有上清，否则会导致裂解不完全。

5. 洗涤时吸丢了沉淀：在吸弃上清时要非常小心，不要吸弃RNA沉淀。

1. 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。

2. 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。

3. 配制溶液应使用无RNase的水。

4. 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

1. 对于培养细胞，TRIzon加量应根据培养板面积决定（每10 cm²面积需要1 mL），用量不足可能导致DNA污染。

2. 对于复杂样本如肌肉、脂肪组织等，可在匀浆后先进行离心（4℃, 12,000 rpm, 10分钟）以除去不溶物质，包括高分子量DNA。

3. 对DNA极度敏感的下游实验，建议用不含RNase的DNase I（货号：CW2090A）对提取的RNA进行处理。

4. 吸取水相时需小心，可适当保留，切勿吸到中间层和下层，避免基因组污染。5. 加入TRIzon Pal™后，需在4℃下离心。

A260/A280比值低可能的原因及解决方案如下：

1. 水相吸取时被酚或蛋白污染。解决方案：吸取水相时需小心，可适当保留，切勿吸到中间层和下层，避免基因组污染。

2. 样品裂解或匀浆不充分。解决方案：在后续制备中，减少起始样品量并延长匀浆时间。

3. RNA沉淀清洗不彻底。解决方案：务必严格按照说明书清洗步骤进行操作。

4. RNA沉淀未完全溶解。解决方案：检查是否有残留的RNA沉淀，务必清洗下管壁上可能附着的所有 RNA沉淀。