使用CWY016M核酸提取试剂盒时DNA纯度低(A260/A280比值不佳)可能是什么原因?如何解决?
0 时间:2025-09-03
DNA纯度低通常表明提取的DNA中含有杂质,如蛋白质、盐离子或有机溶剂(乙醇)。其A260/A280比值理想值约为1.8。
· 比值偏低 (<1.8):通常表示有蛋白质残留。
· 比值偏高 (>2.0):通常表示有RNA残留或胍盐等化学试剂残留。
1. 残留蛋白质污染 (导致A260/A280偏低)
· 原因:
o 蛋白酶K消化不完全或失效。
o 样本量过多,蛋白酶K不足以完全消化所有蛋白质。
o 裂解孵育时间或温度不足。
· 解决方案:
o 确保配制好的蛋白酶K分装保存于-20℃,避免反复冻融导致失活。
o 检查样本量是否在试剂盒规定范围内(血浆≤5 mL,尿液≤4 mL)。如果样本量很大,请按比例增加蛋白酶K的用量。
o 严格保证裂解步骤在60℃孵育30分钟,并可在此期间涡旋振荡数次,以充分裂解和消化。
2. 乙醇残留 (导致A260/A280比值异常并抑制下游实验)
· 原因:
o 洗涤后吸附柱干燥不彻底
· 解决方案:
o 在加入洗脱液之前,将吸附柱在室温静置数分钟,确保残余乙醇完全挥发。
3. 盐离子残留 (导致A260/A230偏低)
· 原因:
o 漂洗缓冲液中的乙醇未正确添加。
· 解决方案:
o 首次使用前,务必确认已向漂洗缓冲液1和2(浓缩液)中加入了指定体积的无水乙醇,并充分混匀。