PCR产物测序

服务介绍

纳米孔测序是一种区别于传统Sanger测序的创新测序技术，能够实现更快、更准、更便捷的测序方法。其工作原理是将DNA的一条链通过纳米级的小孔，根据实时监测并记录核酸链通过纳米孔的电流变化图谱，直接将不同碱基产生的特征性电流信号识别成对应的碱基，以此实现核酸序列的读取。因此无需合成引物和PCR扩增过程即能快速读取出长达上百万个碱基的读长数据，具有超长读长的显著优势。康为世纪通过创新的第四代纳米孔测序进行PCR产物测序服务，1天即可交付测序结果！

立即订购

高准确度

从第一个碱基到最后一个碱基均准确，一致性序列准确度达到99.99%

极速交付

结果无需拼接，最快12小时内交付测序结果

无需引物

测序无需引物，送样便捷

交付全面

交付全长序列、ab1峰图、变异列表、片段分布图等多种文件类型

服务目录

测序项目	样本类型	片段长度（bp）	价格（元）	交付周期（自然日）	交付内容
PCR片段测通/单倍型分析	PCR已纯化/PCR未纯化/PCR胶块	≤1500	10	1日	PCR片段序列（.fasta）、色谱图（.ab1）、Bam文件、片段长度分布图等，单倍型分析额外交付两个单倍型序列文件
		1500-3000	20
		3000-10000	50
		10000-20000	70
		＞20000	咨询

特色服务：单倍型分析

对于存在二倍体杂合序列的待测区域，一代测序无法确定变异具体位于哪一条单倍型上；而康为纳米孔测序则能够有效解决二倍体样本的单倍型分析问题，在PCR片段测通基础上实现单倍型序列的准确拆分，精准交付两条单倍型的完整序列信息。

送样要求

PCR未纯化样本要求

PCR已纯化样本要求

PCR胶块样本要求

片段长度	体积要求	浓度要求		总量要求
片段长度	体积要求	Qubit检测	Nanodrop检测	Qubit检测	Nanodrop检测
≤ 2 kb	≥ 20 μL	≥ 10 ng/μL	≥ 30 ng/μL	≥ 200 ng	≥ 600 ng
2-3 kb	≥ 20 μL	≥ 25 ng/μL	≥ 75 ng/μL	≥ 500 ng	≥ 1500 ng
> 3 kb	咨询

a. Qubit浓度测定特异性强，能有效避免其他杂质的干扰；采用Nanodrop测定的数值，建议不低于上述Qubit浓度要求的3倍。
b. 样品纯度（Nanodrop检测）：OD260/280在1.8-2.0，OD260/230在2.0-2.2；溶液中不含去污剂、表面活性剂、变性剂、螯合剂、高浓度的盐和蛋白质。
c. 样品溶于超纯水中（双蒸水、Milli-Q等），不要使用TE溶解。
d. 采用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，存在明亮条带，无明显拖带。非特异性扩增条带较多的，建议送切胶纯化样本。
e. 送检方式：联系当地取样员取样，或冰袋寄送。

片段长度	体积要求	浓度要求		总量要求
片段长度	体积要求	Qubit检测	Nanodrop检测	Qubit检测	Nanodrop检测
≤ 2 kb	≥ 15 μL	≥ 8 ng/μL	≥ 24 ng/μL	≥ 120 ng	≥ 360 ng
2-5 kb	≥ 15 μL	≥ 20 ng/μL	≥ 60 ng/μL	≥ 300 ng	≥ 900 ng
5-10 kb	≥ 15 μL	≥ 40 ng/μL	≥ 120 ng/μL	≥ 600 ng	≥ 1800 ng
> 10 kb	咨询

a. Qubit浓度测定特异性强，能有效避免其他杂质的干扰；采用Nanodrop测定的数值，建议不低于上述Qubit浓度要求的3倍。
b. 样品纯度（Nanodrop检测）：OD260/280在1.8-2.0，OD260/230在2.0-2.2；溶液中不含去污剂、表面活性剂、变性剂、螯合剂、高浓度的盐和蛋白质。
c. 样品溶于超纯水中（双蒸水、Milli-Q等），不要使用TE溶解。
d. 采用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，存在明亮单一条带，无明显拖带。
e. 送检方式：联系当地取样员取样，或冰袋寄送。

片段长度	电泳上样体积要求	浓度要求		总量要求
片段长度	电泳上样体积要求	Qubit检测	Nanodrop检测	Qubit检测	Nanodrop检测
≤ 2 kb	≥ 20 μL	≥ 10 ng/μL	≥ 30 ng/μL	≥ 200 ng	≥ 600 ng
2-5 kb	≥ 20 μL	≥ 25 ng/μL	≥ 75 ng/μL	≥ 500 ng	≥ 1500 ng
5-10 kb	≥ 20 μL	≥ 50 ng/μL	≥ 150 ng/μL	≥ 1000 ng	≥ 3000 ng
> 10 kb	详询

a. 浓度说明：Qubit浓度测定特异性强，能有效避免其他杂质的干扰；采用Nanodrop测定的数值，建议不低于上述Qubit浓度要求的3倍。
b. 明亮条带：采用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，存在明亮单一条带。
c. 胶块大小：实验室不提供切胶服务，所以应在送样前做好胶块的处理。切胶时应尽可能地切除目的条带周围多余的琼脂糖，减少凝胶体积以提高回收效率。
d. 运输条件：胶块可转入1.5 mL离心管或其他一次性容器中，以便实验人员能取出胶块进行实验。使用封口膜密封管口以防泄漏和污染，联系当地取样员取样，或使用冰袋寄送样本。长途运输不建议送胶块样本，应当送已纯化产物。

场景应用

应用一：模拟ab1文件全新升级，直接可视化关键突变信号，助您快速识别与判断。

应用二：攻克一代测序首端盲区。

应用三：杂合位点更清晰直观。

常见问题

Q1：膜上完全无信号或信号极弱，应如何排查？

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