提取的DNA产量低的解决办法?

0 时间:2025-09-08

DNA产量低通常由以下原因导致,请根据实际情况优化操作:

1) 试剂保存或使用不当。 Buffer GW1使用前应按试剂瓶标签向其中加入指定用量的无水乙醇。同时,请确保所有缓冲液均密封保存,防止蒸发导致浓度改变。Magbeads PN磁珠在使用前务必充分涡旋或颠倒混匀,使其充分重悬。

2) 样本处理或本身存在问题。 样本裂解不完全是产量低的一个主要原因。请确保植物组织已通过液氮研磨或组织破碎仪充分破碎为细粉。对于多糖多酚含量高的植物,请在Buffer PLS中加入β-巯基乙醇至终浓度5%以改善裂解效果。同时,样本的质量和储存条件也极大影响结果,应使用新鲜或妥善保存的样本,反复冻融会严重降解DNA。请确认您的样本起始量在推荐范围内。

3) 关键操作步骤执行存在偏差。

o 结合步骤: 加入Buffer ZB和磁珠后,应充分颠倒混匀30秒,并室温静置5分钟,其间颠倒混匀数次,确保DNA与磁珠充分结合。

o 洗涤步骤: 在漂洗阶段,要小心操作避免吸弃上清时意外吸走磁珠。

o 干燥步骤: 乙醇洗涤后,磁珠应室温干燥5-10分钟,直至无乙醇气味,但应避免过度干燥,否则会导致DNA洗脱效率下降。

洗脱步骤: 使用100 μL Buffer TB,并在65℃下震荡孵育10分钟,以确保DNA充分洗脱。

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