提取的DNA产量低的解决办法?
0 时间:2025-09-08
DNA产量低通常由以下原因导致,请根据实际情况优化操作:
1) 试剂保存不当或使用有误。 Buffer ATL或AL若出现结晶或沉淀,会显著影响裂解效率,需在56℃水浴中加热至完全溶解后再使用。同时,请确保所有缓冲液均密封保存,防止蒸发导致浓度改变。Magbeads PN磁珠在使用前务必充分涡旋使其混合均匀。
2) 样本处理或本身存在问题。 样本裂解不完全是产量低的一个主要原因。请确保组织已充分研磨,适当延长56℃的蛋白酶K消化时间,直至溶液变得清亮、无可见组织碎片。样本的储存条件也极大影响结果,应使用新鲜或妥善冻存的样本,反复冻融会严重降解DNA。同时,请确认您的样本起始量在推荐范围内。
3) 关键操作步骤执行存在偏差。 在结合步骤中,加入异丙醇和磁珠后应保证足够的孵育时间和混匀强度,确保DNA与磁珠充分结合。在洗涤和洗脱阶段,要小心操作避免吸弃上清时意外吸走磁珠。干燥步骤需要格外留意:乙醇洗涤后,磁珠应室温干燥至其表面变为哑黑色、无光泽的状态即可。过度干燥会使DNA难以重悬,导致洗脱效率急剧下降。洗脱时,使用推荐体积的Buffer TB或水,并在56℃下孵育10分钟,可以最大化地将DNA从磁珠上洗脱下来。