提取的RNA纯度低(A260/A280或A260/A230比值异常)的解决办法?
0 时间:2025-09-10
RNA纯度低通常由以下原因导致,请根据实际情况优化操作:
1) 组织研磨不充分或起始量过大会导致裂解不完全,使蛋白质、多糖等杂质大量残留。解决办法:确保组织充分破碎,并严格遵守试剂盒推荐的样本量范围,对于难裂解组织可适当减量。
2) 洗涤步骤不彻底会直接导致盐离子或乙醇残留。解决办法:确保向浓缩洗涤液(Buffer PGW1和Buffer RW2)中正确加入无水乙醇,并遵循指定的洗涤次数和体积。完成洗涤后需充分晾干(约5-10分钟),直至磁珠表面呈哑光,确保乙醇完全挥发。
3) 基因组DNA残留会使A260/A280比值偏高。解决办法:提取过程中增加DNase I消化步骤并确保DNase I活性完好,以彻底去除gDNA污染。
4) RNA降解会导致纯度下降和功能丧失。这通常由RNase污染或操作过程温度过高引起。解决办法:必须全程使用无RNase的枪头、离心管,佩戴手套并勤换,操作尽量快速并在低温下进行。提取完成后应立即将RNA分装并保存于-70℃冰箱,避免反复冻融。