提取的DNA产量低的解决办法?
0 时间:2025-09-10
DNA产量低通常由以下原因导致,请根据实际情况优化操作:
1) 试剂保存不当或使用有误。 Buffer RW2 (concentrate)首次使用前须按试剂瓶标签说明加入相应体积的无水乙醇;所有缓冲液使用后应立即盖紧,防止挥发或污染;Magbeads PN磁珠在使用前务必充分涡旋使其混合均匀。
2) 样本处理或本身存在问题。 组织取样量严格控制在15-25mg(富RNA组织如肝、脾、肾不超过20mg);使用新鲜样本或液氮速冻后-80℃保存的样本,避免反复冻融;组织研磨或匀浆必须充分彻底;裂解液Buffer PL1需在组织未完全解冻前加入,防止RNA降解。
3) 关键操作步骤执行存在偏差。加入Buffer PL2、异丙醇和Magbeads PN后,需确保充分混匀6分钟,使RNA完全结合;洗涤时小心操作,避免吸弃上清时带走磁珠;乙醇洗涤后磁珠需室温晾干3分钟以去除残留乙醇,但避免过度干燥;洗脱时使用50-70μL RNase-Free Water,65℃孵育6分钟以提高洗脱效率。