1）引物：检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解；引物设计是否合理。2）模板：应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；模板为粗品，存在抑制物，建议降低模板浓度；若模板为cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

3）检查反应体系是否配制正确，建议重复实验。

4）检查变性温度是否准确，PCR仪指示温度与实际温度是否相符；退火温度不合适时，可对退火温度设置梯度，摸索合适的退火温度。