（1）菌体量问题：确保菌液量≥600 μL，培养时间充足。若菌液超过600 μL需离心浓缩，避免超过吸附柱载量；

（2）裂解不完全：加入Buffer L2后需温和颠倒混匀8-10次至溶液变澄清紫色，裂解时间不超过2分钟。若未澄清，减少菌体量或分多管处理；

（3）洗脱条件不佳：使用预热至65℃-75℃的Buffer EB洗脱，室温静置2分钟再离心。可重复洗脱提高产量；

（4）操作错误：确保Buffer PW已按照试剂瓶标签说明的体积加入无水乙醇；避免吸入沉淀导致柱堵塞；

（5）质粒特性影响：低拷贝质粒可增加菌液量至3 mL并按扩展步骤操作；大质粒（＞10 kb）需轻柔裂解以减少DNA剪切。