（1）酵母细胞裂解不充分：严格按说明书加入40mg玻璃珠，涡旋振荡10分钟，控制菌体量不超过5×10⁷个酵母细胞（一般对于酿酒酵母OD600=1.0时，相当于1-2×10⁷细胞/mL）；

（2） 试剂准备有误：Buffer P2有沉淀析出时，需加热溶解或放置37℃ 恒温箱中至清亮方可使用；Buffer PW加入乙醇体积不准确（使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇）；

（3）将Buffer EB预热至65℃-70 ℃，并重复二次洗脱；

37℃水浴混匀至澄清后使用。

加入Buffer P2后应温和混匀，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA。此

步骤所用时间应不超过10分钟，避免质粒受到破坏。

导致RNA污染，需补加RNase A至Buffer P1（终浓度100 μg/mL），混匀后2-8℃保存。

可以，使用本试剂盒提取的质粒DNA可用于各种分子生物学实验，如连接、转化、测序和文库筛选等。

本试剂盒除适用于酵母细胞外，也可用于大肠杆菌。

乙醇残留。Buffer PW 洗涤后应尽量离心去除残留的液体，待硅胶膜完全干燥后再加入洗脱缓冲液。

可以。最好按照标准存放。

（1）储存温度不当或超出有效期：已加入RNase A的Buffer P1长时间室温放置可能会出现酶活下降，使用后应及时放回2 ~ 8℃。

（2）菌液体积过高：由于菌体数量过多，导致Buffer P1中RNase A不足以消化菌体中的RNA，建议减少菌液体积进行实验。

可以使用水从离心柱中洗脱 DNA。为了达到最佳洗脱效率，请确保水为无核酸酶（nuclease-free）且 pH 值在 7-8.5 之间。如果需长期保存 DNA，建议使用试剂盒提供的 DNA 洗脱缓冲液。

在质粒条带上方出现的拖尾现象可能表明质粒提取物中存在基因组DNA污染。虽然这种情况并不常见，但基因组DNA可能在裂解过程中被剪切并与质粒共同纯化。加入Buffer P2后剧烈摇晃或涡旋可能会产生断裂的基因组DNA，应避免这种情况。如果裂解液非常粘稠且混合不均匀，建议减少小提实验使用的细胞起始量。

A260/280比值通过比较核酸最大吸收峰260nm与蛋白质最大吸收峰280nm的吸光度值，可评估所洗脱DNA的相对纯度。若中和反应不充分或洗涤步骤不完全，可能导致过量蛋白质残留在基质中并与DNA共同洗脱。

培养基成分和某些细胞成分会降低A260/A230比值。按照实验方案操作可确保去除这些污染物。此外，某些颗粒物可能与DNA一起洗脱，从而影响该比值。若出现这种情况，可在分光光度计（如Nanodrop^®）检测前对洗脱的DNA进行额外15秒离心以沉淀颗粒物。

加入Buffer P2并混匀后溶液应变清亮粘稠，如果溶液未变得清亮，提示可能菌量过大，裂解不彻底，应减少菌体量。