基因编辑效率检测

服务介绍

以CRISPR-Cas9为代表的基因编辑技术正在深刻改变生命科学研究和医学治疗的进程，而精准的编辑效率检测，是确保其安全性与有效性的关键环节。传统的Sanger测序和NGS方法，在快速检测大片段插入/缺失以及复杂结构变异方面存在局限。康为世纪基于纳米孔长读长测序技术，推出基因编辑效率检测服务——只需送测靶点及附近区域的扩增产物，即可准确定量低至1%编辑效率的位点，数据交付快速，结果一目了然，让每一处编辑都清晰可辨。

立即订购

长读长

扩增子长度不受限，同时检测点突变、大片段插入/缺失

高通量

1000×以上深度测序，可全面、精准检测靶点及其周围区域的序列变化，展示低至1%的突变信息

周期短

无需凑样，可同时检测多个样本，从样本签收到交付结果，最快仅需12小时

无偏好

单分子直接测序，无需提供引物，无需额外扩增，无偏好性影响

服务目录

测序项目	样本类型	PCR片段长度	交付周期	交付结果
基因编辑效率检测	PCR未纯化/PCR已纯化	2000 bp以内	1~2自然日	基因编辑效率分析结果(xlsx)、序列比对文件(bam)、片段长度分布图、覆盖深度图等

送样要求

PCR未纯化样本要求

PCR已纯化样本要求

片段长度	体积要求	浓度要求		总量要求
片段长度	体积要求	Qubit检测	Nanodrop检测	Qubit检测	Nanodrop检测
≤ 2 kb	≥ 20 μL	≥ 10 ng/μL	≥ 30 ng/μL	≥ 200 ng	≥ 600 ng
2-3 kb	≥ 20 μL	≥ 25 ng/μL	≥ 75 ng/μL	≥ 500 ng	≥ 1500 ng
> 3 kb	建议送已纯化样本

a. Qubit浓度测定特异性强，能有效避免其他杂质的干扰；采用Nanodrop测定的数值，建议不低于上述Qubit浓度要求的3倍。
b. 样本纯度（Nanodrop检测）：OD260/280在1.8-2.0，OD260/230在2.0-2.2；溶液中不含去污剂、表面活性剂、变性剂、螯合剂、高浓度的盐和蛋白质。
c. 样本溶于超纯水中（双蒸水、Milli-Q等），不要使用TE溶解。
d. 采用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，存在明亮条带，无明显拖带。非特异性扩增条带较多的，建议送已纯化样本。
e. 送检方式：联系当地取样员取样，或冰袋寄送。

片段长度	体积要求	浓度要求		总量要求
片段长度	体积要求	Qubit检测	Nanodrop检测	Qubit检测	Nanodrop检测
≤ 2 kb	≥ 15 μL	≥ 8 ng/μL	≥ 24 ng/μL	≥ 120 ng	≥ 360 ng
2-3 kb	≥ 15 μL	≥ 20 ng/μL	≥ 60 ng/μL	≥ 300 ng	≥ 900 ng
> 3 kb	详询

a. Qubit浓度测定特异性强，能有效避免其他杂质的干扰；采用Nanodrop测定的数值，建议不低于上述Qubit浓度要求的3倍。
b. 样本纯度（Nanodrop检测）：OD260/280在1.8-2.0，OD260/230在2.0-2.2；溶液中不含去污剂、表面活性剂、变性剂、螯合剂、高浓度的盐和蛋白质。
c. 样本溶于超纯水中（双蒸水、Milli-Q等），不要使用TE溶解。
d. 采用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物进行检测，存在明亮单一条带，无明显拖带。
e. 送检方式：联系当地取样员取样，或冰袋寄送。

技术优势

对比项目	纳米孔测序	一代测序	二代测序
读长	不受限	~800bp	150-500bp，受读长限制
周期	~1天	~1天	1周
准确性	可检出低至占比1%编辑形式	无法提供准确编辑效率	可检出占比低至0.5%编辑形式
突变	可检出SNP、InDel及大片段插入缺失	无法给出准确突变形式	可检出SNP、InDel，无法检出大片段变异
扩增	无额外扩增偏好	无额外扩增偏好	建库需额外扩增