可能原因：

①蛋白可能是包涵体没有在上清中，建议通过SDS-PAGE检测裂解液分析上清中是否含有目的蛋白，包涵体蛋白需要按照包涵体蛋白的纯化方式。

②表达量太低，建议优化表达条件。

③洗脱条件过于温和，建议延长洗脱液孵育时间，或使用强度更高的洗脱液