可能原因：

①样品中抗原过少，建议通过SDS-PAGE或Western Blot验证蛋白表达或裂解效率,将抗原量提高至推荐用量。

②抗体与抗原结合力太弱或无法结合，建议优化Lysis/Wash Buffer，或更换结合力/特异性更强的抗体，或选择另一种识别不同表位的抗体。

③蛋白质被降解，建议加入蛋白酶抑制剂，或对温度敏感的抗原，尽量在4C或并于条件下进行实验操作。