（1）酵母细胞裂解不充分：严格按说明书加入40mg玻璃珠，涡旋振荡10分钟，控制菌体量不超过5×10⁷个酵母细胞（一般对于酿酒酵母OD600=1.0时，相当于1-2×10⁷细胞/mL）；

（2） 试剂准备有误：Buffer P2有沉淀析出时，需加热溶解或放置37℃ 恒温箱中至清亮方可使用；Buffer PW加入乙醇体积不准确（使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer PW中加入无水乙醇）；

（3）将Buffer EB预热至65℃-70 ℃，并重复二次洗脱；