预染蛋白与膜结合后，洗涤过程中的去污剂可能导致少量蛋白流失。使用NC膜时该现象更明显，因其对小蛋白的结合能力弱于PVDF膜。建议检测小于20 kDa蛋白时优先选用PVDF膜以增强结合强度；使用0.2 μm孔径的膜以提高蛋白保留率；转膜后可立即用笔标记条带位置，以便在后续实验中识别；同时可适当缩短洗涤时间或降低去污剂浓度以减少蛋白流失。