1）引物设计不够优化，必要时重新设计引物。

2）模板降解或过量，模板不纯，被污染，需重新制备模板。

3）反应程序不够优化。如果出现比目的条带小的杂带，可通过提高退火温度，降低循环数调整；如果出现比目的条带大的杂带，可缩短延伸时间、降低循环数。酶量加入过多。