剥离时间需根据目的蛋白的表达水平进行优化。对于低表达量蛋白，建议剥离15分钟左右；对于高表达量蛋白（如内参）或高上样量情况，可延长至20-40分钟，适当延长处理时间对膜蛋白影响不大。如遇剥离不彻底，可通过延长剥离时间至1小时，或提高反应温度至37℃孵育30分钟。建议优先剥离低表达量蛋白，再进行高表达量蛋白的孵育，以获得最佳效果。