(1) 引物与靶序列可能有非特异性互补或自身聚合成二聚体，降低引物浓度进行优化，或重新设计引物。

(2) 模板降解或过量，通过电泳检查模板完整性及浓度，必要时重新纯化模板。

(3) 提高退火温度，降低循环数调整；若出现比目的条带大的杂带，可缩短延伸时间、降低循环数。