(1) 加样体积失准，使用准确度较好的移液枪，扩大反应体系，将模板做高倍稀释，以大体积加入反应体系中；

(2) 定量PCR仪不同位置温度控制不一致。定期校准仪器。

(3) 模板浓度太低。模板浓度越稀，重复性越差，减少模板稀释度或提高加样体积。(4) 做4-6个复孔，删除其中重复性不好的孔，将剩余的进行后续计算。