（1）具体计算方法请参考说明书，若计算得到的用量超过最低/最高值，则建议直接按最低/最高用量使用；

（2） 若载体片段过长、插入片段过长或片段数过多，克隆阳性率均会降低；

（3） 若某一组分浓度过高可适当稀释后使用，每个组分的用量最好不低于1 μL

（4）当插入片段扩增模板是与克隆载体抗性相同的环状质粒时，推荐加入阴性对照（只加片段）；