①固定不充分。固定液首选4%多聚甲醛，现用现配。不建议使用乙醇,乙醇固定液的渗透力较弱，影响TUNEL标记效率；

②通透不充分，TdT酶未能到达核内，可适当增加通透时间。或通透过度，标准通透条件（0.4% Triton X-100）如导致过度通透，细胞可用0.2% Triton X-100溶液通透5-30 min，不同的细胞所需要的通透时间略有不同，适当调整；

③延长标记时间至2h,并适当增加TdT酶及dUTP的用量；

④确定实验对象细胞有凋亡。准备一份DNase l处理的阳性对照,验证TdT酶反应是否正确进行。