DNA在下游应用中表现不佳该如何解决?
2 时间:2025-08-26
DNA在下游应用中表现不佳通常由以下原因导致:
1. 洗脱液中DNA含量极低。解决办法:请参考前文A2部分的解决方案。
2. 洗脱液中存在磁珠残留。解决办法:微量磁珠残留通常不影响实验结果。如需进一步去除,可将含有洗脱液的离心管试管置于磁力架上吸附后,小心转移上清至新管。
3. 存在盐离子残留。解决办法:严格按顺序添加Buffer EB和Buffer TB,并确保洗涤步骤中彻底去除Buffer DW。必要时可用细尖移液枪头吸尽残留液体 。
4. DNA用量过多影响下游实验。解决办法:过量DNA可能抑制酶反应,建议使用分光光度计在260nm处测定DNA浓度,精确控制使用量。
5. 组织来源DNA发生降解。解决办法:样本量过大可能导致裂解不充分,使内源DNA酶未被完全灭活,建议减少起始样本量。