1. 初始裂解液上柱离心时，样本量过大或裂解液过于粘稠，导致RNA未能有效穿过DNA吸附柱。解决办法：严格遵循推荐样本量。对于核酸含量高的样品（如脾脏、胸腺），可适当减少样本起始量。

2. 在步骤2中，离心力或离心时间不足，导致RNA未能完全穿过DNA吸附柱。解决办法：确保吸附柱上没有液体残留，如果有必要可以重复离心，直至所有的液体通过吸附柱的膜。

3. 实验操作中存在交叉污染。在操作多个样品时，枪头、收集管等耗材的重复使用或飞溅，可能导致RNA产物意外污染DNA洗脱管或DNA吸附柱。解决方法： 勤换枪头，并注意操作手法，避免不同样品间或不同步骤间的交叉污染。