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SuperFastStar Universal Probe Mixture(UNG)

通用型含UNG探针法qPCR预混液

¥258.00

CW3380S

1 mL
5 mL
50 mL

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SuperFastStar Universal Probe Mixture(UNG)为2×qPCR预混液,适用于探针法荧光定量检测,包含Taq DNA Polymerase、Uracil-N-Glycosylase、PCR Buffer、 dNTPs、Mg2+、K+、增强剂和稳定剂等。Taq DNA Polymerase 为双抗体封闭型热启动酶,在55℃及以下温度聚合酶活性封闭率达95%以上,能有效减少低温下的非特异扩增,添加的Uracil-N-Glycosylase和dUTP防污系统,可催化含尿嘧啶的dsDNA和 ssDNA,释放游离尿嘧啶,降低扩增产物交叉污染。独特的PCR缓冲体系可显著提高 qPCR扩增效率,可在多达6个对数级的动态范围内进行准确检测。 本产品适用单重及多重扩增,检测灵敏度高,特异性好,可检测低至单拷贝模板,支持口腔拭子和低浓度血液样本直扩,通用性强,广泛应用于基因表达和病毒检测等。且该预混液甘油含量极低,可直接搭配冻干保护剂进行冻干。
保存条件 运输条件
-20±5℃ 冰袋
Q1:cDNA模板需要稀释吗?应该稀释多少倍进行定量?
A1:

没有具体的稀释参考倍数,一般cDNA每稀释10CT值变大3.3,可以根据这个规律进行合适的稀释。可以使用cDNA原液、10倍稀释液、100倍稀释液作为模板进行定量实验,根据规律选择CT值落在18-28,或者15-33范围内的稀释倍数。也可以参考换试剂之前的稀释倍数。

Q2:扩增曲线形状异常怎么办?
A2:

(1) 扩增曲线不光滑:信号太弱,经系统矫正后产生。建议提高模板浓度重复实验。

(2) 扩增曲线断裂或下滑:一般由于模板浓度较高,基线的终点值大于CT值。建议减小基线终点(CT值-4),重新分析数据。

(3) 个别扩增曲线突然骤降:反应管内留有气泡,由于温度升高后气泡破裂,使仪器检测到的荧光值突然降低所致。建议反应前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。

Q3:标准曲线扩增小于90%或者大于120%,线性关系不佳。
A3:

(1) 加样误差。加大模板稀释倍数,提高加样体积,使用不同稀释梯度的浓度更准确;

(2) 标准品降解,重新制备标准品,重复实验;

(3) 模板浓度过高,存在抑制反应,增加模板稀释倍数;

(4) 引物扩增特异性不好,重新设计引物重复实验。

Q4: NTC(阴性对照)为什么出现CT值?
A4:

NTC出现扩增一般会有两种情况:

(1) NTC与目的基因融解曲线峰形不重叠。一般NTC的Tm值较目的基因Tm值小。这种情下,NTC的CT值是由引物二聚体造成的,并不影响目的基因CT值的采集。(2)  NTC与目的基因融解曲线峰形重叠。NTCTm值等于目的基因的Tm值。这种情况下,说明体系已被气溶胶污染了。

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