
SuperFastStar Universal Probe Mixture(UNG)
通用型含UNG探针法qPCR预混液
¥258.00
CW3380S
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没有具体的稀释参考倍数,一般cDNA每稀释10倍CT值变大3.3,可以根据这个规律进行合适的稀释。可以使用cDNA原液、10倍稀释液、100倍稀释液作为模板进行定量实验,根据规律选择CT值落在18-28,或者15-33范围内的稀释倍数。也可以参考换试剂之前的稀释倍数。
(1) 扩增曲线不光滑:信号太弱,经系统矫正后产生。建议提高模板浓度重复实验。
(2) 扩增曲线断裂或下滑:一般由于模板浓度较高,基线的终点值大于CT值。建议减小基线终点(CT值-4),重新分析数据。
(3) 个别扩增曲线突然骤降:反应管内留有气泡,由于温度升高后气泡破裂,使仪器检测到的荧光值突然降低所致。建议反应前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。
(1) 加样误差。加大模板稀释倍数,提高加样体积,使用不同稀释梯度的浓度更准确;
(2) 标准品降解,重新制备标准品,重复实验;
(3) 模板浓度过高,存在抑制反应,增加模板稀释倍数;
(4) 引物扩增特异性不好,重新设计引物重复实验。
NTC出现扩增一般会有两种情况:
(1) NTC与目的基因融解曲线峰形不重叠。一般NTC的Tm值较目的基因Tm值小。这种情下,NTC的CT值是由引物二聚体造成的,并不影响目的基因CT值的采集。(2) NTC与目的基因融解曲线峰形重叠。NTC的Tm值等于目的基因的Tm值。这种情况下,说明体系已被气溶胶污染了。