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Ultra-Universal One Step Seamless Cloning Mix

通用型一步法无缝克隆试剂盒

购买CW3036M，赠送CW3419S

¥398.00

CW3036M

50 rxns

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本产品是基于同源重组原理开发的一款简单、快速、高效的无缝克隆试剂盒，不依赖繁琐的酶切、连接步骤，可将DNA片段定向克隆至任意载体的任意位点，不受酶切位点限制，可以高效兼容1-5个片段同源重组。2×Ultra Cloning MasterMix中添加了独特的辅助因子及稳定剂，有效提高重组效率，50℃反应5-30min即可进行连接，阳性率达95%以上。经过优化的反应Buffer体系，兼容性更强，提高了复杂体系的克隆成功率。

图a：单片段无缝连接示意图           图b：多片段无缝连接示意图


▪ 快速高效：1-3个片段的连接仅需5-15 min，超过3个片段的连接可以延长至30 min，克隆阳性率高达95%以上。

▪ 操作简便：不受酶切位点的限制，可在任意位点进行克隆，不受平/粘末端的限制。

▪ 无缝连接：插入点不会引入不需要的碱基序列。

▪ 应用广泛：高效克隆50 bp-10 kb片段；也可结合Super pfx高保真酶，应用于定点突变。


如下实验均使用CW3036进行重组反应，CW0808感受态细胞进行转化，CW3339 PCR mix进行菌落PCR。

1.兼容单片段和多片段连接，阳性率高

【实验一】使用CW3036，分别连接5 kb载体和1个，2个，3个不同插入片段，均能获得很好的克隆效果，长斑情况良好，阳性率高达100%。

图1：不同插入片段数量克隆效果


2.长片段克隆效果好

【实验二】分别使用A公司同类产品和CW3036连接5 kb载体和12 kb插入片段，使用CW3036长斑更多，阳性率100%。

图2：与同类产品长片段克隆效果对比


3. 稳定性好

【实验三】将CW3036在室温或37℃放置7天进行热稳定性测试，以及将其反复冻融30次进行冻融稳定性测试，与对照组相比，克隆效果不变。

图3.1：热稳定性测试


图3.2：冻融稳定性测试

2×Super Pfx Master Mix

货号：CW2965M / 5 ml

¥498.00

2×Super Pfx Master Mix（Dye）

货号：CW2969S / 1 mL

¥218.00

TOP10 Competent Cell

货号：CW0807S / 10 tubes

¥158.00

DH5α Competent Cell

货号：CW0808S / 10 tubes

¥158.00

2×HiAmp PCR Master Mix (Dye)

货号：CW3339S / 1 mL

¥108.00
保存条件 运输条件
-20℃ 冰袋
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Q1：在无缝连接体系中模板有什么注意事项？
A1：

（1）具体计算方法请参考说明书，若计算得到的用量超过最低/最高值，则建议直接按最低/最高用量使用；

（2） 若载体片段过长、插入片段过长或片段数过多，克隆阳性率均会降低；

（3） 若某一组分浓度过高可适当稀释后使用，每个组分的用量最好不低于1 μL

（4）当插入片段扩增模板是与克隆载体抗性相同的环状质粒时，推荐加入阴性对照（只加片段）；

Q2：在连接时片段和载体的浓度区间是多少？最低需要投入多少ng的片段及载体？（希望模板投入量尽可能越低越好，对样本包容度更高）
A2：

阳性率和菌落数相关，菌落数一定程度上说明了阳性率，如果客户没有菌落数量要求，在平板上能够挑到阳性即可，是可以调低模板，对于大片段需要投入80-200ng，小片段可放低至20-60ng，具体还需要客户自行调整。

Q3：是否测试过极端大小片段的连接?例如5000bp与200bp大小片段能否连接？
A3：

连接片段不要小于200bp，最好在500bp 及以上；最大测试过12k，能够连接且阳率正确。

Q4：该酶对同源臂的GC含量是否存在要求？
A4：

有要求，合成引物时GC 含量尽量在40-60 之间以确保后续连接效率。

Q5：成功率除以上之外，还与什么相关？
A5：

如果黏性末端形成稳定的二级结构，如发夹结构或者茎环结构，那么成功率会大受影响。

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