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Annexin V-HS Fluor 647/PI Apoptosis Detection Kit

Annexin V-HS Fluor 647/PI 细胞凋亡检测试剂盒

¥758.00

CW9103M

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Annexin V-HS Fluor 647/PI 细胞凋亡检测试剂盒提供了一种快速简便的方法，通过标记早期凋亡细胞（远红）和坏死或晚期凋亡的细胞（红色），用于检测细胞凋亡水平。产品可以使用流式细胞仪或其它荧光检测设备进行检测。
Annexin V（膜联蛋白-V）是一种分子量为 35-36KD的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白，可与磷脂酰丝氨酸（PS）选择性结合。 磷脂酰丝氨酸（PS）主要分布在细胞膜内侧，即与细胞浆相邻的一侧。在细胞发生凋亡的早期，不同类型的细胞都会把磷脂酰丝氨酸外翻到细胞表面，暴露在细胞外环境中。此时，使用远红荧光探针 HS Fluor 647 标记的 Annexin V，即 Annexin V-HS Fluor 647，与外翻的磷脂酰丝氨酸（PS）结合，就可用流式细胞仪或荧光显微镜直接检测到磷脂酰丝氨酸的外翻这一细胞凋亡的重要特征。对于坏死或晚期凋亡的细胞，由于细胞完整性已经被破坏，Annexin V-HS Fluor 647 则可以进入胞浆与处于磷脂层内侧的PS结合，从而也使坏死细胞呈现远红外荧光。
碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种 DNA 结合染料，它可以染色坏死细胞或凋亡晚期丧失细胞膜完整性的细胞的细胞核。PI可以由488，532或546 nm的激光激发，呈现红色荧光。
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Q1：实验结果如何判断？
A1：

活细胞为Annexin V-/PI-，早期凋亡细胞为Annexin V+/PI-，晚期凋亡与坏死细胞为Annexin V+/PI+，裸核细胞为Annexin V-/PI+。

Q2：是否可以仅使用Annexin V-FITC进行检测而不使用PI？
A2：

可以。适用于无核细胞或存在PI干扰的情况，如使用阿霉素处理的样本或红细胞检测。

Q3：是否可以用于组织切片染色（如冰冻或石蜡切片）？
A3：

不可以。该试剂盒适用于细胞悬液，不推荐用于组织切片。

Q4：流式图中左上象限（Annexin V⁻/PI⁺）信号高可能是什么原因？
A4：

通常由机械损伤、消化过度或刺激过强引起的非凋亡途径的细胞死亡，需优化处理条件与细胞操作流程。

Q5：凋亡结果与预期不符可能的原因？
A5：

可能因细胞初始活性差、处理时间或浓度不当导致假阳性或假阴性。

Q6：为什么检测不到凋亡阳性信号
A6：

常见原因包括存在EDTA残留、未使用Binding Buffer缓冲液、染色后洗涤细胞丢失、细胞状态差或外源刺激剂量不当。

Q7：AnnexinV法与Tunel法检测凋亡的区别?
A7：

Annexin V法检测凋亡早期因膜不对称性丧失而外翻的磷脂酰丝氨酸，可与PI联用，通过流式细胞术实现早期与晚期凋亡的定量区分；TUNEL法则检测凋亡晚期产生的DNA断裂片段，适用于组织切片等样本的原位细胞观测。

Q8：必须使用不含EDTA胰酶的原因？
A8：

Annexin V为钙依赖性蛋白，EDTA会螯合Ca²⁺，影响其与磷脂酰丝氨酸的结合，导致结果偏差。

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