2×Super Pfx Master Mix

高保真酶预混液

¥498.00

CW2965M

5 ml

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推荐保真度更高 扩增力更强的CW3419

本产品为优化的2×预混型试剂,由Super Pfx DNA Polymerase、Mg2+、dNTPs以及反应缓冲液组成,只需要添加引物和DNA模板即可进行PCR实验。Super Pfx DNA Polymerase具有3´→5´外切酶活性,保真性约为Taq DNA聚合酶的100倍,是克隆的理想选择。该酶通过引入延伸增强技术,在维持高保真度的同时,实现了10 sec/kb的高速延伸,扩增长度可达20 kb。此外,本产品在兼具高成功率的同时,对于扩增反应困难的长片段、GC-rich区域和过量模板也可以进行扩增。扩增产物的3´端不带有“A”碱基,适用于平末端载体克隆。 本产品分为不含Loading Dye的标准型2×Master Mix(#CW2965)和含有Loading Dye的2×Master Mix(#CW2969)。


扩增速度快:扩增1 kb以下的目的片段时,延伸时间可设为10 sec。扩增1-10 kb的目的片段时,延伸时间可设为20-30 sec/kb。相比以往试剂可大幅度缩短PCR的反应时间。

保真度高:保真度约为Taq DNA polymerase的100倍。

操作简便:本试剂中包含所有除引物、模板以外的PCR组分,便于操作的同时也提高了实验结果的重现性。


1. 扩增能力强

【实验一】使用Super Pfx对人基因组DNA模板(GC含量70%)与水稻基因组DNA模板(GC含量75%)进行扩增;以人全血为样本,使用Super Pfx 进行血液直扩,实验结果如下:

图1-1:扩增高GC片段                  图1-2:血液直扩

实验结果表明:凭借强大的酶促能力,Super Pfx可从容应对GC-rich模板、粗提物模板等各种复杂模板,实现高产量扩增。


2. 扩增片段长

【实验二】以大肠杆菌基因组DNA为模板,用Super Pfx分别扩增5 kb、7 kb、15 kb的片段,实验结果如下:

图2:扩增不同长度片段

实验结果表明:因其持续合成能力强,错配率低,Super Pfx非常适合高产量和高特异性地扩增长片段。


3. 灵敏度高

【实验三】以人基因组DNA为模板,进行10倍梯度稀释,检测Super Pfx的扩增灵敏度。

图3:灵敏度检测

实验结果表明:Super Pfx扩增人基因组DNA,灵敏度可达0.1 ng。

保存条件 运输条件
-20℃ 冰袋
Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。
A1:

1)引物:检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理。2)模板:应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板为粗品,存在抑制物,建议降低模板浓度;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

3)检查反应体系是否配制正确,建议重复实验。

4)检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符;退火温度不合适时,可对退火温度设置梯度,摸索合适的退火温度。

Q2:扩增特异性差:引物二聚体、杂带、拖尾等。
A2:

1)优化反应体系与条件:升高退火温度可以有效提高特异性。另外减少循环数也可以提高特异性,但可能会有几率导致扩增效率的下降,需要根据具体的实验要求优化合适的条件。

2)检查引物是否降解。

Q3:空白对照出现扩增产物。
A3:

1)引物设计不合理:扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

2)若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染,建议更换新的Mix、水或引物重复实验。

3)反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

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